Termocicladores en tiempo real

noviembre 18, 2021by Kalstein
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Un termociclador en tiempo real es un equipo de laboratorio que permite llevar a cabo la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR) de forma eficiente y rápida; mediante la realización automática y cíclica de los cambios de temperatura que se requieren para la amplificación de una cadena de ácido desoxirribonucleico (ADN); a partir de una enzima termoestable. El objetivo de este tipo de PCR es detectar y cuantificar las secuencias especificas de ácidos nucleicos por medio de moleculas fluorescentes en la reacción, donde el incremento de la fluorescencia es la proporcional al incremento de la cantidad de moléculas de ADN amplificadas en la reacción.

Este termociclador posee un moderno un sistema óptico acoplado, que monitoriza la señal de los fluoróforos usados para detectar el producto amplificado. Debido a que la fluorescencia de éstos aumenta conforme el producto se amplifica, se combinan los procesos de amplificación y detección en una sola etapa.

PCR en tiempo real

El principio de la qPCR se basa en la PCR punto final, solo que la forma como se detectan y analizan los productos de la amplificación es diferente. El termino real hace referencia a que la detección de los productos amplificados sucede en cada ciclo de la reacción. Y el termino cuantitativo se refiere a que es posible cuantificar la cantidad de muestra.

Esta técnica posee características importantes como son alta especificidad, amplio rango de detección y rapidez en la visualización del producto. Los sistemas de PCR en tiempo real incluyen un termociclador y una unidad capaz de detectar señales fluorescentes para monitorizar el progreso de la reacción de amplificación, así como un software para el análisis de los datos. Los fluoróforos utilizados para seguir la amplificación del ADN durante la PCR en tiempo real pueden ser con afinidad por el ADN (SYBR Green) o sondas específicas para fragmentos del ADN (sondas Taqman).

Tipos de termocicladores en tiempo real

En el mercado existen diferentes tipos de termocicladores en tiempo real, cuyas diferencias principales son la fuente de energía, que utilizan para la excitación. Por lo general hay tres tipos de fuentes: las lámparas de luz, diodos de emisión de luz (LED) y láseres. Cualquiera sea la molécula fluorescente o reportera utilizada, se excita primero y su señal de emisión colectada a través de un filtro que permite el paso de la longitud de onda correspondiente que llega hasta un fotodetector que captura la información proveniente de la muestra para su análisis en el software del equipo.

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