Fluorómetro vs. Espectrofotómetro

octubre 19, 2021by Kalstein
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Un fluorómetro es un equipo que permite el análisis, la identificación y la cuantificación de sustancias químicas con moléculas capaces de presentar fluorescencia, mediante la técnica de espectrofotometría por fluorescencia o fluorometría. Podemos decir que este equipo es un dispositivo óptico especial empleados en laboratorios, capaz de medir la calidad fluorescente de muestras biológicas o minerales. Dentro de las aplicaciones donde se utiliza un fluorómetro, podemos mencionar las siguientes:

  • Dinámica de proteínas
  • Análisis cuantitativo
  • Estudios de membrana celular
  • La cinética de enzimas
  • Nanoestructuras de carbono
  • Caracterización de sondas fluorescentes
  • Medidas de fosforescencia de corta duración
  • Medidas de estabilidad térmica

Estructura de un fluorómetro

Un fluorómetro posee varios componentes clave. Tiene una fuente de entrada para la luz visible ordinaria, y esta luz pasa a través de un filtro de excitación que permite que sólo las longitudes de onda específicas impacten la celda de muestra del material que se estudia. Cuando este material, ya sea orgánico o inorgánico, es bombardeado por estas longitudes de onda controladas de luz, que emiten fluorescencia, emitiendo luz característica propia que pasa luego a través de un filtro de emisión. Las emisiones son leídas por un detector de luz que produce una lectura para el observador para saber cómo está reaccionando la muestra y lo que su contenido es.

El mecanismo de fluorescencia está marcado por tres pasos secuenciales, llamados respectivamente absorción (1), disipación no radiativa (2) y emisión (3). El fenómeno de fluorescencia posee numerosas aplicaciones prácticas, entre las que se encuentran por ejemplo análisis en mineralogía, gemología, sensores químicos (espectroscopia fluorescente), pigmentos y tintas, detectores biológicos y lámparas fluorescentes.

¿Qué es un espectrofotómetro?

Un espectrofotómetro es un equipo que mide cuánta luz absorbe una sustancia. Su eficiencia, resolución, sensibilidad y rango espectral, dependerán de las variables de diseño y de la selección de los componentes ópticos que lo conforman. La espectrofotometría es la medida cuantitativa de las propiedades de transmisión de un material basado en la onda de luz.

Es utilizado para medir ciertos compuestos, como por ejemplo un medicamento y de esta manera asegurarse de que sea efectivo y seguro para los consumidores. Puede medir el crecimiento bacteriano o diagnosticar a un paciente en función de su orina. También se usa en el análisis de ADN, ARN y proteínas.

Estos equipos nos dan información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra, debido a que cada sustancia tiene un arreglo de átomos tridimensional particular que hace que cada sustancia tenga características únicas. También nos dice cuanta cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en la muestra. La concentración es proporcional a la absorbancia, según la Ley Beer-Lambert: a mayor cantidad de moléculas presentes en la muestra, mayor será la cantidad de energía absorbida por sus electrones. El espectrofotómetro mide la absorbancia de una muestra en los espectros de luz ultravioleta y visible (200 a 850 nm).

Estructura de un espectrofotómetro

  • Fuente de luz: La misma ilumina la muestra. Debe cumplir con las condiciones de estabilidad, direccionalidad, distribución de energía espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son lámpara de tungsteno y lámpara de arco de xenón.
  • Monocromador: Es un dispositivo que permite obtener luz monocromática, y esta constituído por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión. Aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto.
  • Fotodetectores: En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotodetectores para percibir la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro visible.

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