Técnicas de PCR y COVID

noviembre 4, 2021by Kalstein
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La reacción en cadena de la polimerasa popularmente conocida como PCR, es una técnica de Biología Molecular, ampliamente utilizada en la actualidad, en el campo clínico y científico, debido a que permite la amplificación de fragmentos de ADN, partiendo de una cantidad muy pequeña de esta biomolécula.

La PCR es una técnica basada, en una actividad enzimática que ocurre de forma natural o normal en el interior celular de nuestro cuerpo. Ya que en las células las ADN polimerasas son capaces de replicar el ADN nuclear, para obtener dos copias idénticas, que serán distribuidas a dos células hijas durante la mitosis celular.

PCR y COVID

A inicios del año 2020, el virus causante de COVID-19, el SARS-CoV-2 fue detectado a través de una variante de la técnica de PCR, la RT-PCR (reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa en tiempo real), el cual es el ensayo establecido por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como prueba confirmativa de este virus patógeno.

¿Qué es la RT-PCR?

La RT-PCR es una técnica de laboratorio que permite la identificación, detección y cuantificación de ARN, utilizando este ácido nucleico como molde para sintetizar ADN complementario (ADNc), el cual a su vez constituye la plantilla para una reacción de PCR en tiempo real. El aumento exponencial de las copias de ADN se verá reflejado en la aparición de fluorescencia cuya intensidad será directamente proporcional a la cantidad de ARN presente en la muestra analizada, lo que hace que esta reacción sea altamente sensible aun a las pequeñas concentraciones de ARN viral.

Recordemos que el SARS-Cov-2 es un virus de tipo ARN, y para sus detección por RT-PCR primero debe convertirse este ARN viral a ADN, mediante el proceso conocido como transcripción inversa por la acción de una enzima llamada Transcriptasa inversa, y luego este ADN es amplificado por acción  de la ADN polimerasa mediante PCR en tiempo real. La importancia de la amplificación radica, en que en vez de encontrar una pequeña concentración del virus entre millones de cadenas de información genética, se puede disponer de una gran cantidad de ADN viral para confirmar con exactitud la presencia del SARS- Cov-2.

Los genes del coronavirus detectables hasta ahora incluyen: ORF1 (marco de lectura abierta 1) que comúnmente es representado en las secciones a y b, N (nucleocápside), M (membrana), E (envoltura viral), S (espiga viral), y ARN polimerasa dependiente de ARN.

En esta técnica se usa un termociclador de tiempo real, que es un termociclador especial quien permite detectar fluorescencia.

¿Qué muestras utiliza la RT-PCR?

Los hisopados nasofaríngeos y orofaríngeos son las muestras más comúnmente usadas para confirmar la presencia de SARS-CoV-2 mediante RT-PCR.

¿Por qué utilizar la RT-PCR?

La RT-PCR es una técnica altamente sensible y precisa, la cual brinda un diagnostico fiable y bastante certero en tan solo unas 3 horas, aunque en algunos laboratorios, puede durar de 6 a 9 horas. Pero en comparación con otros métodos disponibles de aislamiento del virus, esta prueba es más rápida, y es la que tiene menos posibilidades de error y contaminación, debido a que todo el proceso se lleva a cabo en tubos cerrados. Y actualmente es el método más exacto para el diagnóstico oportuno del coronavirus.

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